中间脉孢霉谷氨酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌和烟草中的表达

用谷氨酸脱氢酶(GDH)提高植物氮肥利用率是国际上生物工程研究的热点之一.通过RT-PCR方法克隆了真菌中间脉孢霉(Neurospora intermedia,简称Ni),好食脉孢霉(N.sitophila),粗糙脉孢霉(N.crassa)的gdh基因,进行序列测定.前两种gdh基因的序列为首次报道.分别将上述gdh基因克隆入pET30a质粒在大肠杆菌中表达,纯化后进行酶活性及米氏常数(Km)测定,结果发现大肠杆菌表达的Ni-GDH具有更高的酶活性,其Km值在0.3~0.45 mmol/L左右.选择Ni-GDH基因转化烟草,发现它能促进烟草在低氮水平下的生长.